MILD ELUTION PROTEIN A MAGNETIC AGAROSE BEADS
用于单克隆抗体及Fc融合蛋白的捕获与纯化。采用多孔超顺磁性琼脂糖凝胶微球与经基因工程改造的温和洗脱型重组蛋白A配基,特别适用于低pH条件下易聚集的抗体衍生分子,如双特异性抗体、IgG4和Fc融合蛋白。
技术与价格咨询型号与规格查看温和洗脱重组配基 可在pH 4.0–5.0条件下洗脱抗体。说明书记载:洗脱h-IgG时峰值在pH 4.5以上,pH 4.0可洗脱90%以上;有助于降低酸诱导的聚集和失活风险。具体目标抗体的洗脱条件需通过实验优化。
超顺磁琼脂糖基质 以多孔超顺磁性琼脂糖凝胶微球为基质,可从细胞培养上清等复杂生物料液中捕获目标抗体,适用于高通量筛选及不同规模纯化。F级粒径为10–40 μm,M级粒径为30–80 μm,可配合移液模式或磁棒模式操作。
支持碱性在位清洗 配基可耐受0.1 M NaOH清洗,帮助去除宿主细胞蛋白、DNA及其他污染物。按说明书执行CIP,并在清洗后将磁珠恢复至中性环境。
| 产品名称(Product name) | PA ME MoxiBeads F | PA ME MoxiBeads M |
|---|---|---|
| 产品编号(Product code) | MX0103F | MX0103M |
| 基质(Matrix) | 超顺磁性琼脂糖凝胶微球 | |
| 配基(Ligand) | 温和洗脱重组蛋白A,源自大肠杆菌(E. coli),≥10 mg/mL | |
| 粒径范围(Particle size)a | 10–40 μm | 30–80 μm |
| 结合能力(Binding capacity)b | ≥40 mg h-IgG/mL纯磁珠 | |
| pH稳定性(pH stability, operational) | 3–12 | |
| pH稳定性(pH stability, CIP) | 2–13 | |
| 化学稳定性(Chemical stability) | 在抗体纯化常用的水相缓冲液中稳定,可耐受0.1 M NaOH清洗 | |
| 储存条件(Storage conditions) | 20%乙醇,2–8 ℃(储存),2–30 ℃(运输) | |
| 供应形式(Supplied as)c | 25%(v/v)分散液 | |
| 有效期(Shelf life) | 2年 | |
a:80%以上体积的微球粒径在此范围内。b:结合能力在4 mg/mL h-IgG中孵育2 h测定,不同抗体和使用方法下可能存在差异。c:计量与计价按纯磁珠体积计算,可按需求定制分散液浓度。
| 规格(纯磁珠体积)与货号(Catalog No.) | F级粒径(10–40 μm) | M级粒径(30–80 μm) |
|---|---|---|
| 1 mL | MX0103F001 | MX0103M001 |
| 5 mL | MX0103F005 | MX0103M005 |
| 25 mL | MX0103F025 | MX0103M025 |
| 100 mL | MX0103F100 | MX0103M100 |
| 1 L | MX0103F901 | MX0103M901 |
表中货号(Catalog No.)对应具体粒径与包装规格,规格按纯磁珠体积计量。如需更大规格或其他规格,请联系销售人员。
使用5–10倍磁珠体积的PBS平衡2–3次(20 mM磷酸钠、150 mM NaCl,pH 7.2–7.4)。
加入样品,室温混匀孵育30–60 min,保持磁珠均匀悬浮;建议上样量为最大结合能力的50–80%。
磁分离后,用5–10倍磁珠体积的结合/洗涤缓冲液洗涤2–3次。
用2–5倍磁珠体积的0.1 M醋酸-醋酸钠(pH 4.0–5.0)洗脱;如需孵育,控制在5–10 min。
可在收集管中预加洗脱液体积10–20%的1 M Tris-HCl(pH 8.0–9.0);低pH敏感抗体应立即中和。
洗脱后先用结合/洗涤缓冲液将磁珠恢复至中性。建议根据料液洁净程度,每1–5个纯化循环执行一次CIP,或在发现收率下降、纯度降低时执行。
| 在位清洗方案 | 目的 | 操作流程 |
|---|---|---|
| 标准方案 | 去除沉淀/变性蛋白 | 用5–10倍磁珠体积的0.1 M NaOH清洗,接触15–30分钟;立即用5–10倍磁珠体积的结合缓冲液洗涤数次,直至pH恢复中性。 |
注意:碱性CIP之前,务必先用中性缓冲液(如结合缓冲液)洗涤磁珠,避免酸性洗脱缓冲液与高浓度碱液直接接触产生放热反应。
长期储存:用20%乙醇洗涤2–3次后,重悬于20%乙醇中,2–8 ℃保存。严禁冷冻。
按纯磁珠体积计算。25%(v/v)分散液使用前需充分混匀,分散液取用量为所需纯磁珠体积的4倍,例如1 mL纯磁珠对应4 mL分散液。
检查上样量、孵育时间及混合状态,建议上样量控制在最大结合能力的50–80%。若洗脱不充分,可将洗脱pH从5.0适度降至4.5或4.0,并针对目标抗体优化。结合能力的标定条件为孵育2 h,常规操作指南建议室温孵育30–60 min,两者应加以区分。
可以。用5–10倍磁珠体积的0.1 M NaOH清洗,接触15–30分钟后立即用结合缓冲液洗涤数次,直至pH恢复中性。碱性CIP前务必先用中性缓冲液洗涤磁珠。
根据料液洁净程度,每1–5个纯化循环执行一次CIP,或在收率下降、纯度降低时执行。长期储存前用20%乙醇洗涤2–3次,再重悬于20%乙醇中,2–8 ℃保存,严禁冷冻,避免磁珠完全干燥。
推荐0.1 M醋酸-醋酸钠,pH 4.0–5.0。说明书提示,甘氨酸-盐酸在该洗脱条件下可能因缓冲能力不足,使混合后的体系pH高于5.0;可采用醋酸-醋酸钠,或按故障排除建议筛选柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。
纯度偏低时可增加洗涤次数或体积,并加强洗涤时的混合以释放被包埋的杂质。样品黏度过高时可适当稀释;使用与容器匹配的磁力架,必要时更换较大容器或分批处理。