PROTEIN A MAGNETIC AGAROSE BEADS
用于单克隆抗体及Fc融合蛋白的捕获与纯化。以多孔超顺磁性琼脂糖凝胶微球为基质,偶联经基因工程改造的耐碱型重组蛋白A,适用于细胞培养上清、血清、腹水等复杂样品,支持抗体高通量筛选和不同规模的纯化。
技术与价格咨询型号与规格查看超顺磁琼脂糖基质 以多孔超顺磁性琼脂糖凝胶微球为基质,可直接处理未经澄清的样品,将样品前处理与目标抗体捕获相结合,减少澄清步骤及其可能带来的样品损失。
耐碱型重组配基 采用经基因工程改造的耐碱型重组蛋白A,可耐受0.1–0.5 M NaOH在位清洗,帮助去除宿主细胞蛋白、DNA及其他污染物;对人IgG的结合能力≥60 mg/mL纯磁珠。
适配不同处理规模 F级粒径(10–40 μm)适用于小规模纯化;M级粒径(30–80 μm)磁响应更快,适用于不同规模的移液模式和磁棒模式纯化,可配合磁力架、自动化设备及更大规模的磁分离器使用。
| 产品名称(Product name) | PA MoxiBeads F | PA MoxiBeads M |
|---|---|---|
| 产品编号(Product code) | MX0102F | MX0102M |
| 基质(Matrix) | 超顺磁性琼脂糖凝胶微球 | |
| 配基(Ligand) | 耐碱型重组蛋白A,源自大肠杆菌(E. coli),≥10 mg/mL | |
| 粒径范围(Particle size)a | 10–40 μm | 30–80 μm |
| 结合能力(Binding capacity)b | ≥60 mg h-IgG/mL纯磁珠 | |
| pH稳定性(pH stability, operational) | 3–12 | |
| pH稳定性(pH stability, CIP) | 2–13.7 | |
| 化学稳定性(Chemical stability) | 在抗体纯化常用的水相缓冲液中稳定,可耐受0.1–0.5 M NaOH清洗 | |
| 储存条件(Storage conditions) | 20%乙醇,2–8 ℃(储存),2–30 ℃(运输) | |
| 供应形式(Supplied as)c | 25%(v/v)分散液 | |
| 有效期(Shelf life) | 2年 | |
a:80%以上体积的微球粒径在此范围内。b:结合能力在4 mg/mL h-IgG中孵育30 min测定,不同抗体和使用方法下可能存在差异。c:计量与计价按纯磁珠体积计算,可按需求定制分散液浓度。
| 规格(纯磁珠体积)与货号(Catalog No.) | F级粒径(10–40 μm) | M级粒径(30–80 μm) |
|---|---|---|
| 1 mL | MX0102F001 | MX0102M001 |
| 5 mL | MX0102F005 | MX0102M005 |
| 25 mL | MX0102F025 | MX0102M025 |
| 100 mL | MX0102F100 | MX0102M100 |
| 1 L | MX0102F901 | MX0102M901 |
表中货号(Catalog No.)对应具体粒径与包装规格,规格按纯磁珠体积计量。如需更大规格或其他规格,请联系销售人员。
以下完整列出说明书附录中的物种及免疫球蛋白类型,供Protein A、Protein G初步选型参考。具体抗体及Fc融合蛋白需通过小规模实验确认。
| 物种 | 类型 / 亚型 | Protein A | Protein G |
|---|---|---|---|
| 人(Human) | IgG1 | +++ | +++ |
| IgG2 | +++ | +++ | |
| IgG3 | - | +++ | |
| IgG4 | +++ | +++ | |
| IgD | - | - | |
| IgA, IgM | variable | - | |
| 小鼠(Mouse) | IgG1 | - | +++ |
| IgG2a | +++ | +++ | |
| IgG2b | +++ | +++ | |
| IgG3 | ++ | +++ | |
| 大鼠(Rat) | IgG1 | - | + |
| IgG2a | - | +++ | |
| IgG2b | - | ++ | |
| IgG3 | - | ++ | |
| 兔(Rabbit) | IgG | +++ | +++ |
| 牛(Cow) | IgG | ++ | +++ |
| 山羊(Goat) | IgG | - | ++ |
| 猪(Pig) | IgG | +++ | +++ |
| 狗(Dog) | IgG | ++ | + |
| 鸡(Chicken) | IgY | - | - |
−:不结合或微弱结合;+:弱结合;++:中等结合;+++:强结合;variable:结合存在差异。符号不代表本产品实测载量。IgA、IgM、IgD及IgY并非IgG亚型,列出用于适用性参考。
使用5–10倍磁珠体积的PBS平衡2–3次(20 mM磷酸钠、150 mM NaCl,pH 7.2–7.4)。
加入样品,室温混匀孵育30–60 min,保持磁珠均匀悬浮;建议上样量为最大结合能力的50–80%。
磁分离后,用5–10倍磁珠体积的结合/洗涤缓冲液洗涤2–3次。
用2–5倍磁珠体积的0.1 M甘氨酸或柠檬酸盐(pH 3.5–4.0)洗脱;如需孵育,控制在5–10 min。
可在收集管中预加洗脱液体积10–20%的1 M Tris-HCl(pH 8.0–9.0);低pH敏感抗体应立即中和。
洗脱后先用结合/洗涤缓冲液将磁珠恢复至中性。建议根据料液洁净程度,每1–5个纯化循环执行一次CIP,或在发现收率下降、纯度降低时执行。
| 在位清洗方案 | 目的 | 操作流程 |
|---|---|---|
| 标准方案 | 去除沉淀/变性蛋白 | 用5–10倍磁珠体积的0.1–0.5 M NaOH清洗,接触15–30分钟;立即用5–10倍磁珠体积的结合缓冲液洗涤数次,直至pH恢复中性。 |
注意:碱性CIP之前,务必先用中性缓冲液(如结合缓冲液)洗涤磁珠,避免酸性洗脱缓冲液与高浓度碱液直接接触产生放热反应。
长期储存:用20%乙醇洗涤2–3次后,重悬于20%乙醇中,2–8 ℃保存。严禁冷冻。
按纯磁珠体积计算。25%(v/v)分散液使用前需充分混匀,分散液取用量为所需纯磁珠体积的4倍,例如1 mL纯磁珠对应4 mL分散液。
检查上样量、孵育时间、混合状态及磁珠损失。建议上样量控制在最大结合能力的50–80%。若洗脱不充分,可按说明书筛选更低pH的洗脱条件(如pH 2.8–3.0);低pH敏感抗体应立即中和。
可以。用5–10倍磁珠体积的0.1–0.5 M NaOH清洗,接触15–30分钟后立即用结合缓冲液洗涤数次,直至pH恢复中性。碱性CIP前务必先用中性缓冲液洗涤磁珠。
根据料液洁净程度,每1–5个纯化循环执行一次CIP,或在收率下降、纯度降低时执行。长期储存前用20%乙醇洗涤2–3次,再重悬于20%乙醇中,2–8 ℃保存,严禁冷冻,避免磁珠完全干燥。
按说明书建议,在首次纯化前对新磁珠进行一次完整的空白运行,包括CIP步骤,以洗脱不稳定的配基。
纯度偏低时可增加洗涤次数或体积,并加强洗涤时的混合以释放被包埋的杂质。样品黏度过高时可适当稀释;使用与容器匹配的磁力架,必要时更换较大容器或分批处理。